El cromatograma

3.3.01 Cromatograma diferencial

Es un cromatograma obtenido con un detector diferencial (Fig. 1A).

3.3.02 Cromatograma integral

Es un cromatograma obtenido con un detector integral (ver Fig. 1B).

3.3.03 Línea o punto de partida

Es el punto o línea sobre el papel o capa cromatográfica donde se aplica la sustancia a separar (P en Fig. 2).

3.3.04 Mancha

Es una zona sobre el papel o capa fina que tiene una apariencia más o menos circular.

3.3.04.1 Diámetro de la mancha (ST en la Fig. 2)

Es la anchura de la mancha de un compuesto antes o después de la cromatografía.

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Figura 1.- Cromatogramas típicos. A, obtenido con un detector diferencial; B, obtenido con un detector integral.

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Figura 2.- Cromatograma típico en plano

3.3.05 Línea base

Es la parte del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando sólamente sale fase móvil de la columna.

3.3.06 Pico

Es la parte de un cromatograma diferencial que muestra la respuesta del detector cuando un compuesto es eluido de la columna (ver Fig. 1A). Dos o más compuestos se pueden eluir como un pico sin resolver cuando su separación es incompleta.

3.3.06.1 Base de un pico (CD en la Fig. 1A)

Es la interpolación de la línea base entre los dos extremos del pico.

3.3.06.2 Area del pico (CHFEGJD en la Fig. 1A)

Es el área comprendida entre el pico y su base.

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Figura 3.- Anchuras de un pico gaussiano a diferentes alturas en función de la desviación típica del pico

3.3.06.3 Máximo del pico (E en la Fig. 1A)

Es el punto del pico en el que la distancia a la base, medida en dirección paralela al eje que representa la respuesta del detector, es máxima.

3.3.06.4 Altura del pico (EB en la Fig. 1A)

Es la distancia entre el máximo del pico y su base, medida en dirección paralela al eje que representa la respuesta del detector.

3.3.06.5 Desviación típica (s)

En la ecuación que relaciona a la anchura y altura de un pico gaussiano,

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y es la altura del piCo en cuAlquier punto del piCo, yo es la altura del pico en el máximo, x es la distancia desde la ordenada (es decir, la mitad de la anchura en ese punto) y s es la desviación típica del pico. En la práctica, la desviación típíca se puede calcular a partir de uno de los valores de anchura de pico especificados más abajo.

3.3.06.6 Varianza del pico

Es el cuadrado de la desviación típica (s2 ).

3.3.07 Anchura de pico

La anchura de pico viene expresada en las dimensiones de la retención (tiempo o volumen), y se mide en paralelo a la línea base. Si la línea base no es paralela al eje que representa al tiempo o volumen, la anchura del pico se debe dibujar paralela a este eje. Normalmente en cromatografía se utilizan tres medidas de anchura de pico (ver Fig. 1A y Fig. 3).

3.3.07.1 Anchura de pico en la base (wb)

Es el segmento de la base del pico interceptado por las tangentes en el punto de inflexión, a ambos lados del pico. (KL en la Fig. 1A y Fig. 3)

3.3.07.2 Anchura de pico a la mitad de la altura (wh)

Es la longitud de la línea paralela a la base del pico al 50 % de la altura del pico, y limitada por las líneas de subida y bajada del pico. (HJ en la Fig. 1A y Fig. 3).

Nota: La anchura del pico en la base (wb ), se puede llamar "anchura base" . Sin embargo la anchura a mitad de la altura, no se debe llamar nunca " anchura media ",pues esto tiene un significado completamente diferente. Asimismo, no se debe utilizar el símbolo w1/ 2 en lugar de wh.

3.3.07.3 Anchura de pico en los puntos de inflexión (wi ) (FG en la Fig. 1A y Fig. 3).

Es la longitud de una línea trazada entre los puntos de inflexión, y paralela a la base del pico.

3.3.07.4

En el caso de un pico gaussiano (simétrico), las anchuras de pico se relacionan con la desviación típica (s) del pico, según las siguientes ecuaciones.

wb = 4 s

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wi = 2 s

3.3.08 Cola

Asimetría del pico con respecto a la línea base, de tal forma que la línea de subida es más pendiente que la de bajada. En cromatografía en papel y capa fina, se refiere a la distorsión de unA mancha que muestra una región difusa en la parte trasera, en la dirección del flujo.

3.3.09 Frente

Asimetría del pico con respecto a la línea base, de forma tal que la línea de subida es menos pendiente que la de bajada. En cromatografía en papel y capa fina, se refiere a la distorsión de un mancha que muestra una región difusa en su parte delantera, en la dirección del flujo.

3.3.10 Escalón

Es la porción de un cromatograma integral que registra la cantidad de un compuesto o el correspondiente cambio en la señal del detector cuando el compuesto sale de la columna (ver Fig 1B).

3.3.10.1 Altura de escalón

Es la distacia, medida en la dirección de la respuesta del detector, entre las prolongaciones en línea recta de las líneas bases, a ambos lados de un escalón. (NM en la Fig. 1B)

3.3.11 Patrón interno

Es el compuesto que se añade a la muestra en una concentración conocida, para facilitar la identificación cualitativa y /o realizar la determinación cuantitativa de los componentes de la muestra.

3.3.12 Patrón externo

Es un compuesto que está presente en una muestra patrón de concentración y volumen conocidos, la cual se analiza separadamente de la muestra desconocida y en idénticas condiciones. Se utiliza para facilitar la identificación cualitativa y/o realizar la determinación cuantitativa de los componentes de la muestra. El volumen del patrón externo (muestra patrón), no es preciso conocerlo cuando es idéntico al de la muestra desconocida.

3.3.13 Marcador

Es una sustancia de referencia, cromatografiada con la muestra para ayudar a la identificación de los componentes.